【抗血癌】牛樟芝三萜類dehydroeburicoic acid造成血癌細胞DNA損害與凋亡
論文發表在英國期刊: Phytomedicine (植物醫學)
台灣特有種牛樟芝，在許多的研究中都已經被證實具有很好的抗癌與抑癌的作用，本研究透過體內與體外實驗來研究牛樟芝抑制血癌(Antileukemia) 的效果與作用機制。首先，透過乙醇萃取出樟芝中富含三萜類活性物質FEA (Ethyl acetate fraction 乙酸乙酯部分乙酸乙脂層)。結果顯示牛樟芝FEA 可以使H2A.X和Chk2磷酸化，導致HL60血癌細胞中DNA的損傷。牛樟芝FEA透過增加PARP裂解和活化caspase-3而達成，能造成癌細胞凋亡。利用高效液相層析儀(HPLC)，從牛樟芝FEA中分離出五種主要的三萜，分別是(1) antcin K、 (2) antcin C、 (3) zhankuicacid C、(4) Zhankuicacid A 和( 5) dehydroeburicoic acid，這五種物質中dehydroeburicoic acid（DeEA）具有最大的癌細胞毒性。在HL60的異種移植實驗中(將癌細胞植入動物體內)，牛樟芝DeEA三萜能使癌腫瘤重量和大小顯著下降，但對小鼠的體重無明顯影響。
牛樟芝三萜造成癌細胞凋亡與DNA破損
三萜4 &三萜5有劑量相關性的增加血癌細胞HL60的凋亡數量，但只有三萜5 (DeEA: dehydroeburicoic acid去氫齒孔菌酸) 造成癌細胞凋亡數有隨時間增長而增加。如下圖
三萜4 &三萜5 (DeEA)有劑量相關性的造成PARP的裂解，進而造成癌細胞凋亡，如下圖。
【註】在細胞分裂的過程中，當DNA出現不正常斷裂需要修復時，PARP在修復過程中扮演重要角色。由於快速分裂的癌細胞發生DNA斷裂的頻率較高，一旦PARP被抑制(裂解)，則DNA損傷會在癌細胞內迅速積累，最終導致癌細胞死亡。
實驗發現，從牛樟芝子實體萃取並分離出5種三萜，其中三萜5 (DeEA: dehydroeburicoic acid去氫齒孔菌酸) 是最主要的活性成分，能有效造成癌細胞凋亡與DNA破損。
經72小時後，DeEA比FEA展現出更強的癌細胞毒性。 DeEA更有效強化促凋亡蛋白Bid/Bad表現，DeEA可活化caspases 3,7,9 (凋亡蛋白3,7,9)活性，進而促使血癌細胞凋亡，如下圖。
牛樟芝的DeEA三萜在濃度 10 μg/ml下，可造成血癌細胞HL60嚴重受損，其染色體雙股螺旋斷裂形成不正常彗星尾。下圖，DeEA三萜在濃度 10 μg/ml下，透過顯微影像分析可見彗星尾形出現異常。
DeEA(10 μg/ml)在72小時後造成PARP裂解(PARP在DNA修復中扮演重要功能)，無法修補損傷的癌細胞，最終導致癌細胞死亡。
小結:DeEA(10 μg/ml)造成癌細胞HL60的DNA破壞，同時也造成PARP裂解，讓PARP無法修補癌細胞。
在異種移植動物模式中，DeEA顯著抑制腫瘤成長
將HL 60血癌細胞移植接種到免疫缺陷無胸腺裸鼠上。經口服DeEA(10 μg/g)連續5週，癌細胞成長顯著被抑制。
在第31天，控制組腫瘤大小平均為229.46 mm3 ，而在DeEA治療組平均腫瘤大小為102.75 mm3，DeEA治療組腫瘤大小顯著小於對照組。
在腫瘤平均重量上，DeEA治療組腫瘤平均也顯著低於控制組。
