【抗肝癌2】牛樟芝造成肝癌細胞凋亡
论文发表在国际期刊: Journal of Ethnopharmacology (民族药理学)
摘要
实验使用两种人类肝癌细胞株，分别为B型肝炎病毒引起的Hep3B肝癌细胞与HepG2肝癌细胞。
实验发现牛樟芝甲醇萃取物(MEM)可抑制癌细胞活力并从对肝癌细胞造成细胞毒性，促使癌细胞凋亡。在牛樟芝萃取物 100μg/ml浓度下，对正常肝细胞则未观察到毒性。
在使用牛樟芝萃取物 100μg/ml浓度下，经72小时后在人类肝癌细胞株HepG2的凋亡率(即癌细胞死亡)为98.3%，在肝癌细胞株 Hep3B的凋亡率为39.5%。
牛樟芝萃取物(MEM)造成caspase 3 & caspase 8活性上升，进而对肝癌细胞HepG2造成水解破坏，促使癌细胞凋亡数量增加。研究结果指出牛樟芝萃取物透过活化caspase 3 & caspase 8与调控细胞周期的进程，可达到抑制肝癌细胞繁殖。
研究結果
1.抑制癌细胞活性
下图1(A)可见不同浓度的牛樟芝萃取物，经48小时后，对细胞活细的影响。其中肝癌细胞HepG2, Hep3B 的活性与牛樟芝浓度有显著的剂量相关性；也就是牛樟芝浓度越高，抑制癌细胞活性愈明显。正常肝细胞(Chang liver cells & rat hepatocytes)较不受影响。
下图1(B)在相同牛樟芝萃取物浓度 50μg/ml下，在不同时间条件(24, 48, 72小时)下，对细胞活性的影响。其中肝癌细胞HepG2, Hep3B 的活性有显著的时间相关性；也就是作用时间愈长，抑制活性愈明显。正常肝细胞(Chang liver cells & rat hepatocytes)仅受轻微影响。
2.牛樟芝萃取物(MEM)造成癌細胞凋亡
下图2(A) 肝癌细胞HepG2, Hep3B与不同浓度牛樟芝萃取物(0, 50, 100μg/ml)作用后，经72小时，从显微镜下可以明显观察出牛樟芝浓度愈高，肝癌细胞Hep3B & HepG2数量愈少，且癌细胞出现凋亡特征。牛樟芝萃取物可促进肝癌细胞的凋亡。
下图2(B)，在浓度100μg/ml牛樟芝萃取物作用下，经72小时，透过萤光染色技术观察肝癌细胞型态的变化。图左是B型肝炎病毒引起的肝癌细胞株Hep 3B，图右是另一株肝癌细胞株Hep G2，与控制组(control)相较，MEM组(牛樟芝萃取物)会造成肝癌细胞HepG2 & Hep3B的细胞核被压缩(大箭头所指)与破碎(箭头所指)的现象，此现象为典型细胞凋亡会出现的特征。
3.肝癌細胞凋亡率
下图左(A) 肝癌细胞HepG2, Hep3B与不同浓度牛樟芝萃取物(0, 50, 100μg/ml)作用后经72小时，癌细胞凋亡率。整理成下表:
上表可见牛樟芝萃取物浓度愈高，肝癌细胞HepG2, Hep3B凋亡率愈显著。浓度100μg/ml下，肝癌细胞HepG2凋亡率高达98.3%；肝癌细胞 Hep3B凋亡率也有39.5%。
下图右(B) 肝癌细胞HepG2, Hep3B在相同牛樟芝萃取物 50μg/ml浓度下，经不同作用时间(24, 48, 72小时)，癌细胞凋亡率。整理成下表:
上表可见牛樟芝萃取物作用时间愈长，肝癌细胞HepG2, Hep3B凋亡率愈显著。经72小时的肝癌细胞HepG2凋亡率高达30.2%；肝癌细胞 Hep3B凋亡率亦达19.1%。
4.调控细胞周期，造成癌细胞凋亡
从细胞复制分裂的过程分析中，发现牛樟芝萃取物主要是在G0/G1阶段对肝癌细胞HepG2造成细胞周期停滞而导致癌细胞凋亡。下表可见不同牛樟芝萃取物浓度与作用时间，在不同细胞周期造成的凋亡表现。红框为牛樟芝萃取物 50μg/ml浓度，经72小时，对HepG2的凋亡率达81.5%。
5.活化凋亡蛋白酶，造成癌細胞凋亡
牛樟芝萃取物(MEM) 造成凋亡蛋白酶caspase 3 & caspase 8活性上升，进而对肝癌细胞HepG2产生水解破坏，促使癌细胞凋亡数量增加。
研究结果指出牛樟芝萃取物传递出死亡讯息因子，进而活化caspase-8，caspase-8会进一步活化caspase 3，caspase 3是癌细胞凋亡的主要执行者，最终造成癌细胞凋亡(死亡)。
牛樟芝(Niuchangchih, Antrodia cinnamonmea)的生理活性成份为：三萜类（Triterpenoids）、多糖体（Polysaccharides）、腺苷（Adenosine）、超氧歧化酶（SOD）、麦角固醇（Ergosterol）、羊毛固醇（Lanosterol）、免疫蛋白（Immunity Protein）、维生素（Vitamins）、核酸（Nucleic Acid）、胺基酸（Amino Acid）、苯类(benzenoids)、苯醌衍生物(benzoquinone derivates )、马来酸（ Maleic acid）琥珀酸（Succinic acid）、凝集素（Lectin）、木质素（Lignin）、矿物质（钙、磷、铁、锗等）
