【抗乳癌1】 牛樟芝抑制人类乳癌细胞繁殖经体内与体外实验
论文发表在国际期刊: Food and Chemical Toxicology (食品与化学毒理学)
根据卫生福利部发布的102年癌症统计资料显示，乳癌持续高居台湾女性癌症之首。平均每天约有28名妇女罹患乳癌、每天有5名妇女死于乳癌，成为妇女最重要的健康议题之一。
乳癌除了侵犯乳房，更可能转移到远处器官如骨骼、肺、肝、脑等，造成身体健康之损害，甚至危害生命。
鸿海郭台铭夫人于2005年因乳癌转移至肝脏、肺脏病逝。冰雪奇缘中文主唱大陆女歌手姚贝娜，2015年仅33岁因乳腺癌复发病逝。
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中国医药大学杨新玲教授研究团队，实验验证发现牛樟芝发酵液能导致人类乳癌细胞株MCF-7产生细胞凋亡的作用(凋亡可视为癌细胞的自杀)，使凋亡细胞（apoptotic cells）的数量随着使用剂量的浓度增加而增加。
再进一步以人类乳癌细胞株MDA-MB-231做试验，其结果为当牛樟芝发酵液的浓度增加且时间延长时，对于乳癌细胞的存活率具有抑制的效果。
经5周动物试验后，进一步将各组裸鼠牺牲，取出各鼠的肿瘤进行体积量测。可以清楚的发现控制组裸鼠的肿瘤大小随着实验的时间增加而增加；且高剂量牛樟芝的乳癌肿瘤抑制效果较低剂量好。高剂量牛樟芝发酵液对于乳癌细胞的抑制效果很明显，7只裸鼠中有2只的肿瘤已萎缩至看不见，4只肿瘤明显变小，显示牛樟芝对于抑制肿瘤增生具有明显的效果。
回顾学者们已发表之论文与科学期刊，可知牛樟芝组成成分复杂，用中药煎煮牛樟芝，并不能达到同样的抗癌作用，唯有透过生物科技，透过专业设备对牛樟芝进行萃取、纯化、分离，去除对正常细胞有害的物质，并以活性测试、高效液相层析仪检验，才能取得珍贵的牛樟芝活性成分。
1. 在细胞周期sub–G1阶段，牛樟芝呈现剂量相关性增加癌细胞凋亡
2.牛樟芝透过降低Cyclin, CDK, PCNA数量，进而抑制癌细胞扩散能力
在细胞复制分裂的过程称为细胞周期(cell cycle)，细胞周期分为G1, S, G2, M四阶段，每阶段的进程是由不同的Cyclin (周期素) ,CDK(周期素依赖性激酶), CKI(CDK抑制因子)所调控。
下图左A，Cyclin D1, Cyclin E, CyclinA, CDK, PCNA参与MDA-MB-231乳癌细胞复制，在使用不同牛樟芝剂量(0,40,80,160,240μg/mL)下，经24小时后，可发现Cyclin, CDK, PCNA呈现随牛樟芝剂量增加而蛋白数量降低。
下图右B， 使用牛樟芝剂量160μg/mL，并每4小时记录一次，共24小时，可发现Cyclin, CDK, PCNA呈现随时间增加而蛋白数量降低(减少癌细胞复制)。可见牛樟芝在160μg/mL剂量下，可于24小时内造成癌细胞扩散能力下降。
下图，在不同细胞周期阶段(G1, S, G2, M)，有不同Cyclin(周期素)负责参与细胞复制。
3.动物实验中牛樟芝对抑制癌细胞发展的效果
在动物实验中，于第0周于皮下植入乳癌细胞MDA-MB-231后，连续五周观察1.动物体重，2.肿瘤体积，3.肿瘤重量。在五周后会动物将被牺牲，取出乳癌肿瘤并量测其体积与重量。
动物实验分为五组: 1. 控制组, 2.牛樟芝55mg/kg组, 3.牛樟芝110 mg/kg组, 4.NS-398乳癌药组
(1)动物体重
所有动物均无体重降低的现象。牛樟芝组(55/110 mg/kg)体重控制在最接近第0周的体重。
(2)肿瘤体积
牛樟芝在抑制癌细胞肿瘤增生上，呈现显著的剂量与时间相关性。牛樟芝110 mg/kg在抑制肿瘤增生上的效果最显著，优于乳癌用药NS-398 (COX-2抑制剂)。牛樟芝在肿瘤抑制上相较控制组更有显著抑癌效果。
(3)肿瘤重量
在五周后进行病理解剖，取出各组七只动物的乳癌肿瘤并量测肿瘤大小与重量
下图实验结果明显指出牛樟芝110 mg/kg(红框)在抗肿瘤扩散的效果最显著，7只裸鼠中有2只的肿瘤已成功抑制乳癌，有4只肿瘤明显变小。牛樟芝110 mg/kg抑制肿瘤效果优于乳癌用药NS-398 (COX-2抑制剂)。
下图是各组取出肿瘤的平均重量，牛樟芝110 mg/kg组的肿瘤重量是各组最低的，有效抑制癌细胞扩散与肿瘤增生，与控制组有显著差异(p < 0.05)。
4.以免疫组织化学染色法观察牛樟芝抑制癌细胞扩散
前面的研究发现，牛樟芝有效抑制癌细胞扩散与肿瘤增生。接下来藉由免疫组织化学染色法，从癌细胞切片组织中，进一步量测与癌细胞扩散有关连性的cyclin D1与PCNA蛋白。
下图，牛樟芝110 mg/kg组显著减少癌细胞cyclin D1与PCNA 数量，影响G1细胞周期进展，进而达到抑制肿瘤扩散的效果。
5.以Bcl-2染色法与TUNEL分析观察牛樟芝造成癌细胞凋亡
进一步采用 Bcl-2染色法与TUNEL分析观察牛樟芝造成乳癌细胞凋亡。
下图左，实验结果指出牛樟芝110 mg/kg可降低Bcl-2，进而造成癌细胞凋亡。
下图右，透过TUNEL分析指出牛樟芝110 mg/kg造成癌细胞凋亡后的DNA裂解增加，达显著水准。
